牛副結核（M.pt）酶聯免疫分析試劑盒

發布時間： 2019/5/30　　點擊次數： 1395次

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牛副結核（M.pt）酶聯免疫分析試劑盒

本試劑盒僅供研究使用。

使用目的：本試劑盒用于測定牛血清、血漿及相關液體樣本中副結核（M.pt）表達。

實驗原理

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中牛副結核（M.pt）表達。用純化的牛副結核（M.pt）抗體包被微孔板，制成固相抗體，可與樣品中副結核（M.pt）相結合，經洗滌除去未結合的抗原和其他成分后再與HRP標記的副結核（M.pt）抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成終的。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），與CUTOFF值相比較，從而判定標本中牛副結核（M.pt）的存在與否。

牛副結核（M.pt）酶聯免疫分析試劑盒試劑盒組成

標本要求

1．標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融

2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

牛副結核（M.pt）酶聯免疫分析試劑盒操作步驟

編號：將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照2孔、陽性對照2孔、空白對照1孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）

加樣：分別在陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照50μl。然后在待測樣品孔先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，
溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復5次，拍干。
加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。
溫育：操作同3。
洗滌：操作同5。
顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.
終止：每孔加終止液50μl，終止反應（此時藍色立轉）。
測定：以空白空調零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應在加終止液后15分鐘以內進行。

計算和結果判定：

試驗有效性：陽性對照孔平均值≥1.00; 陰性對照平均值≤0.10

臨界值（CUT OFF）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

陰性判定：樣品OD值< 臨界值（CUT OFF）者為牛副結核（M.pt）陰性

陽性判定：樣品OD值≥ 臨界值（CUT OFF）者為牛副結核（M.pt）陽性

牛副結核（M.pt）酶聯免疫分析試劑盒注意事項

1．操作嚴格按照說明書進行，本試劑不同批號組分不得混用。

2．試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。

3．濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。

封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

5．底物請避光保存。

6．試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準，使用雙波長檢測時，參考波長為630nm