人黑色素細胞抗體ELISA試劑盒操作方法

發布時間： 2014/11/27　　點擊次數： 854次

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樣品收集、處理及保存方法：

血清……操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原

和內毒素的試管。收集血液后，1000×g離心10分鐘將血紅

細胞迅速小心地分離。

2、血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。

3、細胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4、組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘，取上清液。

5、保存……如果樣品不立即使用，應將其分成小部分-70℃保存，避免反復冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒，檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

人黑色素細胞抗體ELISA試劑盒操作步驟：

   使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產生加樣上的誤差。
   根據待測樣品數量加上標準品的數量決定所需的板條數。每個標準品和空白孔建議做復孔。每個樣品根據自己的數量來定，能使用復孔的盡量做復孔。
   加入稀釋好后的標準品50ul于反應孔、加入待測樣品50ul于反應孔內。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，37℃溫育45分鐘。
   甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
   每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，37℃溫育30分鐘。
   甩去孔內液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數增加一次。
   每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，37℃溫育5分鐘。避免光照。
   取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應立即測定結果。
   在450nm波長處測定各孔的OD值。

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