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多克隆抗體技術(shù)之抗體鑒定
發(fā)布時(shí)間： 2011-12-08 點(diǎn)擊次數(shù)： 2325次多克隆抗體技術(shù)之抗體鑒定
（一）抗體的鑒定
1、抗體的效價(jià)鑒定 不管是用于診斷還是用于治療，制備抗體的目的都是要求較價(jià)。不同的抗原制備的抗體，要求的效價(jià)不一。鑒定效價(jià)的方法很多，包括有試管凝集反應(yīng)、瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價(jià)的方法，以資比較。如制備抗抗體的效價(jià)，一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗(yàn)來(lái)鑒定。
2、抗體的特異性鑒定 抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識(shí)別能力。抗體的特異性高，它的識(shí)別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來(lái)表示。交叉反應(yīng)率可用競(jìng)爭(zhēng)抑制試驗(yàn)測(cè)定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競(jìng)爭(zhēng)抑制曲線，計(jì)算各自的結(jié)合率，求出各自在IC50時(shí)的濃度，并按下列公式計(jì)算交叉反應(yīng)率。
交叉反應(yīng)率=IC50時(shí)抗原濃度（Y）/ IC50近似抗原物質(zhì)的濃度（Z）X 100%
如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管，而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無(wú)窮大時(shí)，表示這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為0，即該血清的特異性較好。
3、抗體的親和力 抗體的親和力是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小、抗體分子的結(jié)合位點(diǎn)與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵、疏水鍵、側(cè)鏈相反電荷基因的庫(kù)侖力、范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示，K的單位是L/mol，通常K的范圍在108～1010/mol，也有多達(dá)1014/mol。抗體親和力的測(cè)定對(duì)抗體的篩選，確定抗體的用途，驗(yàn)證抗體的均一性等均有重要意義。
（二）抗血清的凍存
抗血清收獲后，加1/萬(wàn)硫柳汞或1/萬(wàn)的疊氮鈉防腐，或加入等量的中性甘油，分裝小瓶，置-20℃以下的低溫保存，數(shù)月至數(shù)年內(nèi)抗體效價(jià)無(wú)明顯變化。注意避免反復(fù)凍融。也可將抗血清冷凍干燥后保存。
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